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本试剂盒采用独特的磁分离技术从测序反应中除去游离的荧光标记物。生物纳米磁珠在最佳的结合条件下选择性的结合测序用的延伸产物。MSW buffer专门用于清除游离的荧光标记物，盐离子和酶。本试剂盒可以手工或者自动化对测序产物进行纯化。

在自动测序凝胶中，含有过量未结合的荧光标记物会造成高背景的荧光信号。为了获得更好的测序结果，在测序电泳前需要将游离的荧光标记dNTP除去。

• 无水乙醇
  
• 70%乙醇(不要使用变性乙醇)
  
• 96孔磁力架
  
• 多通道移液枪
  
• 96孔板
  
• Elution Buffer (10mM Tris pH8.5,TE Buffer，去离子水或HiDi Formamide)

• 充分摇匀DyeMag beads使磁珠完全悬浮。
  
  • DyeMag beads有时候会沉到底部，为保证DyeMag beads混合均匀需要将磁珠彻底悬浮。否则磁珠比例将会改变导致结果不理想。
• 加入0.5μL DyeMag beads和测序产物2倍体积大小的无水乙醇到每个孔中。例如，加入0.5μL DyeMag beads和10μL无水乙醇到5μL测序产物中。用移液枪吸取样品上下吹打7～10次或者将样品置于涡旋振荡器，彻底混合样品。
  
  • 无论测序产物体积多少均使用0.5μL DyeMag beads；
    
  • 如果测序产物的体积相等，您可将DyeMag beads和无水乙醇加到一起，充分混匀后加入10.5μL DyeMag beads和无水乙醇的混合物到5μL测序产物中。
• 室温静置1min。
  
• 将板置于magnetic separator 30s或直到溶液澄清为止。
  
• 将板继续放置于magnetic separator，用移液枪小心吸取并弃去上清，勿将磁珠扰动。
  
  • 小心操作勿将磁珠扰动或吸到磁珠；
    
  • 完全移除上清非常重要，因为其中含有过多的荧光染料和污染物。
• 每孔加入100μL MSW buffer，用移液枪吸取磁珠上下吹打7～10次或者将样品置于涡旋振荡器，彻底混匀样品。
  
• 将板置于magnetic separator 30s或直到溶液澄清为止。
  
• 将板继续放置于magnetic separator，用移液枪小心吸取并弃去上清，勿将磁珠扰动。
  
  • 小心操作勿将磁珠扰动或吸到磁珠；
    
  • 请尽可能移除掉全部上清。
• 加入150μL 70%乙醇到每个孔中，用移液枪吸取磁珠上下吹打7～10次或者将样品置于涡旋振荡器使其充分悬浮。
  
• 将板置于magnetic separator 30s或直到溶液澄清为止。
  
• 将板继续放置于magnetic separator，用移液枪小心吸取并弃去上清，勿将磁珠扰动。
  
  • 小心操作勿将磁珠扰动或吸到磁珠；
    
  • 请在吸掉上清后短暂离心，将板置于magnetic separator 30s后移除残留的上清。
• 将DyeMag Beads室温下风干约15min或烘箱50℃烘5min。
  
  • 如果用50℃烘干DyeMag beads，请不要超过5min，过度干燥将导致结合的荧光染料降解。
• 加入15～20μL elution buffer到每个孔中。用移液枪吸取磁珠上下吹打10次或涡旋1min使其充分悬浮。室温静置5min。
  
• 将板置于magnetic separator 30s或直到溶液澄清为止。
  
• 板继续放置于magnetic separator，将17μL上清转移到测序可用的新板中。
  
  • 留下3μL上清以防DyeMag beads被转移到测序用的板中。误吸的DyeMag beads将影响下游实验。
    
  • 如果不小心吸到DyeMag Beads，只需重新转移上清使其和DyeMag beads分离。

• 荧光强度低
  

  可能原因	解决方案
  DyeMag Beads未充分结合 测序用的延伸产物	请往每个孔中正确加入DyeMag Beads和无水乙醇； 结合步骤中请增加结合时间和混合次数。
  实验过程丢失DyeMag Beads	确保吸取时不会吸到磁珠
  洗脱步骤未水浴	请将洗脱液和DyeMag Beads的混合物在65℃水浴5min。

• 染料残留在洗脱出的DNA中造成污染
  

  可能原因	解决方案
  没有完全移除用来促进结合或洗脱的缓冲液	确保已除去板中孔内的任何液滴。
  清洗DyeMag Beads不够充分	确保在洗脱步骤中DyeMag Beads已充分悬浮。